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本试剂盒只能用于科学研究,  不得用于医学诊断

小鼠 (Mouse)  UDP-N-乙酰基葡萄糖胺 (UDP-GlcNAc) ELSA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA） 。往  预先包被UDP-N-乙酰基葡萄糖胺（UDP-GlcNAc）抗体的包被微孔中， 依次加入标本 、标准品 、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤 。 用底物TMB显色 ，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 ，并在酸  的作用下转化成最终的黄色 。颜色的深浅和样品中的UDP-N-乙酰基  葡萄糖胺（UDP-GlcNAc ）呈正相关 。用酶标仪在450nm 波长下测  定吸光度（OD 值） ，计算样品含量 。

样品收集 、处理及保存方法

1.   血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞 刺激， 收集血液后 ，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心 地分离 。

2.   血浆： EDTA 、柠檬酸盐或肝素抗凝 。3000 转离心 30 分钟取上 清 。

3.   细胞上清液 ：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物 。

4.   组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎 。3000 转离心 10 分钟 取上清 。

5.   保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 -20℃ ,  避免反复冻融 ，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。

自备物品

1.  酶标仪（450nm）

2.   高精度加样器及枪头：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL

3.   37℃恒温箱

操作注意事项

1.   试剂盒保存在 2-8℃ ,   使用前室温平衡 20 分钟 。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶 ，这属于正常现象 ，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用 。

2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存 。

3.   浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 书操作时样本已经稀释5 倍 ，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度 。

4.   严格按照说明书中标明的时间 、加液量及顺序进行温育操作 。

5.   所有液体组分使用前充分摇匀 。

试剂盒组成

注 ：标准品（S0-S5）浓度依次为 ：0 、50 、100 、200 、400 、800 ng/ml

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释 ：蒸馏水按 1： 20 稀释， 即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水 。

洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体 ，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽

孔内液体 ，在吸水纸上拍干 ，如此洗板 5 次 。

2.    自动洗板机 ：每孔注入洗液 350μL ，浸泡 1min ，洗板 5 次 。

操作步骤

1.   从室温平衡 20min后的铝箔袋中取出所需板条 ，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃ 。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3.   样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加 。

4.   除空白孔外 ，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶

（HRP） 标记的检测抗体 100μL， 用封板膜封住反应孔， 37℃水浴 锅或恒温箱温育 60min 。

5.   弃去液体， 吸水纸上拍干 ，每孔加满洗涤液 ，静置 1min ，甩去  洗涤液， 吸水纸上拍干 ，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板） 。

6.   每孔加入底物 A 、B 各 50μL ，37℃避光孵育 15min 。

7.   每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值 。

结果判断

绘制标准曲线 ：在 Excel 工作表中， 以标准品浓度作横坐标 ，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 本浓度值 。

 试剂盒性能

1.   准确性 ：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值， 大于等于 0.9900 。

2.  灵敏度 ：最低检测浓度小于 1.0ng/ml 。

3.  特异性： 不与其它可溶性结构类似物交叉反应 。

4.  重复性 ：板内 、板间变异系数均小于 15% 。

5.  贮藏 ：2-8℃ ,  避光防潮保存 。

6.  有效期： 6 个月

免责声明

1.    试剂盒仅供研究使用， 不得用于临床实验或人体实验， 否则所

产生的一切后果， 由实验者承担 ，本公司概不负责 。

2.    严格按照说明书操作， 实验者违反说明书操作 ，后果由实验者 承担 。