BCA 蛋白浓度测定试剂盒

产品简介：

BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA  Protein  Assay  Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测 方法之一 BCA 法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单， 高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

产品特性：

1、灵敏度高：检测浓度下限 25μg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5μg，待测样体积为 1-20 μ l；

2、在 50-2000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。

3、BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS， 5%的 Triton X-100 ，5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保  EDTA 低于 10mM，无 EGTA，二硫苏糖醇低于 1mM，β-巯基乙醇低于 0.01%。

4、不适用 BCA 法时建议试用优选生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

包装清单：

产品编号        产品名称                   包装

P0012-1                     BCA 试剂 A                                       100ml

P0012-2                     BCA 试剂 B                                        3ml

P0012-3                  蛋白标准(50mg/ml BSA)                     1ml

说明书 1 份

保存条件：

BCA 试剂 A 和 B 室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。

注意事项：

需酶标仪一台，测定波长为 540-595nm 之间，562nm 最佳。需 96 孔板。如果没有酶标仪，也 可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大 BCA 工作液 的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。

使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

EDTA 浓度必须小于 10mM，不兼容 EGTA。

不适用 BCA 法时，请试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.  根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液，充 分混匀。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。

2.  完全溶解蛋白标准品，取 10 μl  稀释至 100μl，使终浓度为5mg/ml。蛋白样品在什么溶  液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见， 也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。

3.  将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μl 加到 96 孔板的标准品孔中， 加用于稀释标准品的溶液 补足到 20 μl。

4.  加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中，加用于稀释标准品的溶液到 20 μl。

5.  各孔加入 200 μl BCA 工作液，37℃放置 30 分钟。

注:  也可以室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断 加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。

6.  测定 A562 ，540-595nm 之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度

常见问题：

1.  测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质。

2.  是否每次测定时都需要做标准曲线？

建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并 且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测 定宜每次都做标准曲线。

使用本产品的文献：

1. Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY. Toxicol Appl Pharmacol.

2004 Jan 15;194(2):141-55.

2.Dual effects of cycloheximide on U937 apoptosis induced by its combination with VP-16. Wu RC, Chen DF, Liu MJ, Wang Z. Biol Pharm Bull. 2004 Jul;27(7):1075-80.

3.  A  protein  delivery  system:  biodegradable  alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic  acid)  composite microspheres.  Zheng  CH,  Gao  JQ,  Zhang YP,  Liang  WQ.Biochem Biophys  Res  Commun.  2004  Oct 29;323(4):1321-7.

4. β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue.Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.