1. 预期用途

本试剂盒设计用于定量检测血清、血浆中乙肝表面抗原浓度，仅供研究使用，不得用于医学诊断。

2. 简介

乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，只有抗原性。但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2～6个月，当丙氨酸氨基转移酶升高前2～8周时，可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。

3. 检测原理 

试剂盒采用双抗体夹心法原理：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及校准品中待测物，加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物，加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。4. 包含的实验材料实验材料

如需单独采购通用型组分，请提供对应的货号。

5. 需要但未包含的实验材料

· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套枪头；

· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；

· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；

· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。

6. 试剂的准备及储存

· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存；

· 1×洗液的配制：（20×）浓缩洗液如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。配制好的洗液可以在2~8℃保存1周；

· 校准品的配制：准备7个试管，先将5×校准品（32 IU/mL）稀释5倍至1×校准品（6.4 IU/mL），的依次倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下图所示，样品稀释液作为零浓度校准品S0。

· 7. 样品采集、预处理及储存

· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血清样品冻融不超过2次。

· 血浆：使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血浆样品冻融不超过2次。

· 不能检测含有叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。

· 样品应物微生物污染。

· 

8. 实验步骤

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。

注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。

· 

· 结果计算

双波长检测结果无需进行调，直接进行标曲拟合及结果计算。

单波长检测结果建议使用0浓度校准品OD值调0后进行标曲拟合及结果计算。

建议使用以下方式进行标准曲线的拟合：

l 四参数逻辑（4-P）曲线拟合：建议以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；

l 点对点拟合：各相邻点之间分别单独进行线性拟合，分段计算；

其他标准曲线拟合方式：多项式、双对数亦可使用。

也可以使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

9. 检测的局限性

样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。

样本浓度低于LOQ定量限时，检测结果无法进行准确定量。

最高结果上限为：最高浓度校准品×样本稀释倍数。

最低结果下限为：LoQ×样本稀释倍数

LoQ 见产品性能指标章节

10. 产品性能指标

准确度——精密度（Accuracy-Precision）

重复性（Intra-Assay）（操作内，n=20）

操作内精密度（测定中的精密度）在固定的条件下（相同操作者、相同仪器、相同试剂批次、单日内）使用3个血清样本分别检测20次进行评价，CV＜10%。

再现性（Inter-Assay）（操作间，n=60）

再现性（测定间的精密度）在不同的条件下（不同操作者、不同仪器、不同试剂批次、多日内）使用3个血清样本分别进行重复检测统计评价，CV＜15%。

分析灵敏度（Analytical Sensitivity）

以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。

HBsAg adr、adw及ay亚型最低检出限为：

adr亚型≤0.1IU/mL； adw亚型≤ 0.1IU/mL；ay亚型≤0.2IU/mL。

线性（Linearity）

本实验依据CLSI指导原则EP06-A，选取2份不同的血清样本进行评价。结果显示在标示的线性范围内，检测结果的相对偏差＜20%。

分析特异性（Analytical specificity）

其他相关因子在稀释缓冲液中制备为50ng/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。 

11. 注意事项

· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！

· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。

· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。

· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。

· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。

12. 技术要点

· 不同批次的试剂盒不能混用，不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测，尽管是同一批次试剂，也可能存在板与板之间的差异。

· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测，不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果的计算。

· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。

· 底物显色剂应当为无色，如变蓝表明已变质，不能应用于实验。

· 使用适当的封板膜密封微孔板条，以便检测结果更加可靠。

· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。

· 应当遵循说明书的操作进行实验，不按照说明书的操作将导致实验结果的变化，任何不遵循说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。