产品内容：

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。

试剂二：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。

   试剂三：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 5mL 蒸馏水，溶解后再加入 2.5mL 试剂二，混匀。

标准品：液体 1mL×1 支，1mmol/L 无机磷标准液，4℃保存。

产品说明：

磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。

总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。

自备仪器和用品：

离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸馏水和浓硫酸。

操作步骤：

一、有机磷消化：

取带盖试管，加入精确称取的约 0.1g 组织，加浓硫酸 1 mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴10min 左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一 200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水 3.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待测。

二、测定：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。

3.测定：

混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，分别记为 A 空白

管、A 标准管、A 测定管。三、组织总磷含量计算：

总磷含量(mmol /g FW)= [C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W

=0.005×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W

C 标准液：1 mmol/L；V 总：上清液总体积，5 mL=0.005 L。W：样品质量，g。

注意事项：

1、试剂三需临用前配制，限当天使用。

2、测定前先用 1~2 个样品做预实验，如吸光值大于 1 时，需用蒸馏水做相应稀释。