组织铁含量检测试剂盒说明书  微量法

规 格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前配制，加入 5 mL 蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用；

2、 试剂二：临用前配制，加入 235 μL 冰醋酸，加入 7.5 mL 蒸馏水充分溶解；溶解后 4℃保存一周；

3、 标准液：1 μmol/mL Fe3+标准液。临用前稀释 8 倍即 0.125 μmol/mL 的标准溶液进行实验，现用现配。

产品说明：

铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。

亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。

技术指标：

最低检出限：0.00206 μmol/mL

线性范围：0.0039-0.25 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。4000g 4℃离心 10 分钟，取上清。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至520nm。蒸馏水调零。

加样表：

三、组织铁含量计算

1．按组织质量计算：

组织铁含量（μg/g 质量）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷W= 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W 2．按组织蛋白浓度计算

组织铁含量（μg/mg prot）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）

= 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

C标准液：0.125μmol/mL Fe3+标准液；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；55.845： Fe的相对分子质量，55.845μg/μmol。

注意事项：

1、 当ΔA大于0.6 时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。

2、 试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。