淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）试剂盒说明书

规格：100管/96样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代谢过程唯一的可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。

在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4- 葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。

在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。

测定原理：

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生 NADPH，使 340nm 下吸光值增加。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 3mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存； 试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 3mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存。样本的前处理：

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议

500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；

2、 工作液的配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照每个样本 850μL:50μL:50μL 的比例混合，临用前配制，半小时内使用。

3、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液，立即混匀，记录 340nm 处 1min

时的吸光值 A1 和 6min 时的吸光值A2，计算 ΔA=A2-A1。