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ELISA试剂盒对温度环境有哪些要求?


上海瑞番生物科技有限公司 / 2021-02-09

ELISA属固相,抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的时机,只有靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的进程,因而需经分散才干到达反响的终点。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反响总是需求必定时刻的温育。

  ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不可溅起,不可发作气泡。

  加标本一般用微量加样器,按规则的量参加板孔中。

  每次加标本应更换吸嘴,以免发作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液,再在其间参加血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以保证混和。

  加酶结合物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程敏捷完成。在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完成需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。

  温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是试验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在建立ELISA办法作反响动力学研究时,试验表明,两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时,ELISA试剂盒产品的生成可达高峰。为加速反响,可进步反响的温度,有些试验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中,以形成多的沉积。但因所需时刻太长,在ELISA中一般不予选用。


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